2. Einheit - Praktikumsteil

2.1 Restriktionsansatz der DNA-Proben

Durch deine Vorüberlegungen sollten dir folgende Sachverhalte nun klar sein:

Es gibt Gemeinsamkeiten und Unterschiede zwischen der DNA von verschiedenen Individuen.
Restriktionsendonukleasen schneiden (hydrolysieren) DNA-Moleküle an ganz bestimmten Stellen.
Durch Restriktion verschiedener DNA-Proben mit demselben Restriktionsenzym lassen sich Informationen über Unterschiede in deren Basensequenzen erlangen.

Du bist nun für den ersten Teil des Praktikums vorbereitet. Also los geht´s!

Aufnahme der Flüssigkeit

Einstellen des gewünschten Volumens durch Drehen des Einstellrings (2).
Sicheres Aufstecken der Pipettenspitze (4).
Bedienungsknopf (1) bis zum ersten Anschlag niederdrücken.
Die Spitze senkrecht in die Flüssigkeit eintauchen.
Bedienungsknopf langsam zurückgleiten lassen.
Spitze aus der Flüssigkeit herausziehen und außen anhaftende Tröpfchen an der Wand abstreifen.

Abgabe der Flüssigkeit

Spitze an die Gefäßwand anlehnen.
Bedienungsknopf langsam bis zum ersten Anschlag und weiter bis zum zweiten Anschlag drücken, dabei die Flüssigkeit von der Spitze abstreifen.
Bedienungsknopf tief gedrückt halten, während Sie die Spitze aus dem Gefäß herausziehen; dann erst den Bedienknopf hochgleiten lassen.

Spitze durch Druck auf den seitlichen Abwurfknopf (3) in einen vorbereiteten AbfaIIbeutel abwerfen.

Pipettenspitzen 15

Restriktionspuffer – 10x (RB) 1 Eppi (15µl)

BamHI / HindIII Enzymmix (ENZ) 1 Eppi (10µl)

Mikropipette

Eppendorf-Reaktionsgefäße in verschiedenen Farben 6

Folienschreiber

Abfallbehälter

Eppigefäßhalter aus Styropor

Eisbehälter

Pinzette oder Latexhandschuhe

DNA-Proben (beim Praktikumsleiter) 5 Proben

Brutschrank oder Wasserbad – (37 °C)